國(guó)標(biāo)法測(cè)定大腸桿菌樣本的細(xì)菌總數(shù)

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?p>實(shí)驗(yàn)原理：國(guó)標(biāo)法操作的原理

實(shí)驗(yàn)器材：

培養(yǎng)箱，10只移液管，1只250ml錐形瓶，5只大試管，試管架，4個(gè)平皿，500ml大燒杯1個(gè)，電子天平，紗布，脫脂棉，滅菌鍋，PH計(jì)或PH試紙，100ml量筒，橡皮手套，超凈臺(tái) 實(shí)驗(yàn)藥品： 磷酸鹽緩沖液，蒸餾水，LB培養(yǎng)基，瓊脂，5%NaOH，5%HCl 實(shí)驗(yàn)步驟： 一：

10只移液管，1只250ml錐形瓶，5只大試管，4個(gè)平皿，500ml大燒杯1個(gè)，100ml量筒進(jìn)行洗滌，然后一起放入高壓蒸汽滅菌鍋中在121攝氏度條件下滅菌20min。滅完菌后烘干，完成后放入超凈臺(tái)中。

用酒精擦拭超凈臺(tái)，紫外消毒30min 二：

1：用電子天平稱(chēng)取成品LB3.1241g和瓊脂1.8756g放入250ml的潔凈錐形瓶中。 2：用量筒量取125ml的蒸餾水加入該錐形瓶中，制成培養(yǎng)基。 3：用棉花堵住該錐形瓶的瓶口，用牛皮紙包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再將培養(yǎng)基放入滅菌鍋中在121攝氏度之下滅菌20min。 4：滅完菌后放入超凈臺(tái)中備用。 三：

1：取1只無(wú)菌250ml錐形瓶，用量筒向其中加入49mlPBS 2：將1ml樣品加入到該錐形瓶中，搖勻制成1:50的細(xì)菌溶液。 3：取4只試管，編號(hào)1—4 4：用無(wú)菌移液管分別向4只試管中加入9ml的PBS 5：用1ml無(wú)菌移液管從樣品中移取1ml菌液加入到1中.震蕩試管使菌液均勻。 6：用1ml無(wú)菌移液管從1號(hào)試管中移取1ml的細(xì)菌溶液加入2號(hào)試管中，搖勻 7：用另一只1ml無(wú)菌移液管從2號(hào)試管中移取１ｍｌ細(xì)菌溶液，加入3中，搖勻．．．．．．以此類(lèi)推直至4只試管中均加入了細(xì)菌溶液。 9：取4只平皿，編號(hào)1—4 10：分別用4只無(wú)菌移液管從這4只試管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０攝氏度溫度下的培養(yǎng)基，約１５ｍｍ厚度。緩慢旋轉(zhuǎn)平皿使菌液與培養(yǎng)基混合均勻；待培養(yǎng)基冷凝后倒置。

11：將培養(yǎng)基在３6攝氏度條件下培養(yǎng)12小時(shí)。

12：取出培養(yǎng)皿，選擇細(xì)菌個(gè)數(shù)在30至300個(gè)之間的平皿數(shù)細(xì)菌的個(gè)數(shù)。 四：實(shí)驗(yàn)結(jié)果（記得在操作過(guò)程和得到結(jié)果時(shí)拍照） 1號(hào)，2號(hào)菌落個(gè)數(shù)多不可計(jì)，舍棄 4號(hào)平皿中菌落數(shù)目小于10cfu，舍棄

3號(hào)平皿中菌落分布較均勻，數(shù)3號(hào)中的菌落數(shù)，一共有210個(gè)cfu。 計(jì)算樣品中細(xì)菌濃度為：1.05×105Cfu/ml

來(lái)源網(wǎng)絡(luò)

點(diǎn)評(píng)

超凈臺(tái)中的實(shí)驗(yàn)步驟講述詳細(xì)，明確，不錯(cuò)。前面的步驟敘述有點(diǎn)亂，建議按照如下標(biāo)題重新調(diào)整順序。 實(shí)驗(yàn)步驟： 1、 儀器清洗

將燒杯，培養(yǎng)皿、試管等儀器用洗衣粉清洗，超聲5min.然后用清水清洗，超聲5min,最后用三蒸水清洗，放入烘箱中烘干。 2、 培養(yǎng)基配制

精確稱(chēng)量。。。。。。。。。。放入錐形瓶中，加入。。。。mL蒸餾水，搖勻 3，滅菌

包扎、滅菌，烘干備用

3、 超凈臺(tái)中的操作（如上） 除了實(shí)驗(yàn)步驟和結(jié)果，還要有討論和注意事項(xiàng) 例如：實(shí)驗(yàn)討論： 1、評(píng)價(jià)該方法（操作簡(jiǎn)易程度，靈敏度如何，適用性） 2、為何選擇細(xì)菌個(gè)數(shù)在30至300個(gè)之間的平皿數(shù)細(xì)菌的個(gè)數(shù)？ 注意事項(xiàng) 比如各種儀器的使用注意事項(xiàng)，以及保持潔凈，防止染菌等。

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