國標(biāo)法測定大腸桿菌樣本的細菌總數(shù)
實驗?zāi)康?p>實驗原理:國標(biāo)法操作的原理
實驗器材:
培養(yǎng)箱,10只移液管,1只250ml錐形瓶,5只大試管,試管架,4個平皿,500ml大燒杯1個,電子天平,紗布,脫脂棉,滅菌鍋,PH計或PH試紙,100ml量筒,橡皮手套,超凈臺 實驗藥品: 磷酸鹽緩沖液,蒸餾水,LB培養(yǎng)基,瓊脂,5%NaOH,5%HCl 實驗步驟: 一:
10只移液管,1只250ml錐形瓶,5只大試管,4個平皿,500ml大燒杯1個,100ml量筒進行洗滌,然后一起放入高壓蒸汽滅菌鍋中在121攝氏度條件下滅菌20min。滅完菌后烘干,完成后放入超凈臺中。
用酒精擦拭超凈臺,紫外消毒30min 二:
1:用電子天平稱取成品LB3.1241g和瓊脂1.8756g放入250ml的潔凈錐形瓶中。 2:用量筒量取125ml的蒸餾水加入該錐形瓶中,制成培養(yǎng)基。 3:用棉花堵住該錐形瓶的瓶口,用牛皮紙包住瓶口,用橡皮筋扎牢,再將培養(yǎng)基放入滅菌鍋中在121攝氏度之下滅菌20min。 4:滅完菌后放入超凈臺中備用。 三:
1:取1只無菌250ml錐形瓶,用量筒向其中加入49mlPBS 2:將1ml樣品加入到該錐形瓶中,搖勻制成1:50的細菌溶液。 3:取4只試管,編號1—4 4:用無菌移液管分別向4只試管中加入9ml的PBS 5:用1ml無菌移液管從樣品中移取1ml菌液加入到1中.震蕩試管使菌液均勻。 6:用1ml無菌移液管從1號試管中移取1ml的細菌溶液加入2號試管中,搖勻 7:用另一只1ml無菌移液管從2號試管中移?。保恚旒毦芤海尤?中,搖勻......以此類推直至4只試管中均加入了細菌溶液。 9:取4只平皿,編號1—4 10:分別用4只無菌移液管從這4只試管中移?。保恚斓木褐糜?只平皿中,加入45—50攝氏度溫度下的培養(yǎng)基,約15mm厚度。緩慢旋轉(zhuǎn)平皿使菌液與培養(yǎng)基混合均勻;待培養(yǎng)基冷凝后倒置。
11:將培養(yǎng)基在36攝氏度條件下培養(yǎng)12小時。
12:取出培養(yǎng)皿,選擇細菌個數(shù)在30至300個之間的平皿數(shù)細菌的個數(shù)。 四:實驗結(jié)果(記得在操作過程和得到結(jié)果時拍照) 1號,2號菌落個數(shù)多不可計,舍棄 4號平皿中菌落數(shù)目小于10cfu,舍棄
3號平皿中菌落分布較均勻,數(shù)3號中的菌落數(shù),一共有210個cfu。 計算樣品中細菌濃度為:1.05×105Cfu/ml
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點評
超凈臺中的實驗步驟講述詳細,明確,不錯。前面的步驟敘述有點亂,建議按照如下標(biāo)題重新調(diào)整順序。 實驗步驟: 1、 儀器清洗
將燒杯,培養(yǎng)皿、試管等儀器用洗衣粉清洗,超聲5min.然后用清水清洗,超聲5min,最后用三蒸水清洗,放入烘箱中烘干。 2、 培養(yǎng)基配制
精確稱量。。。。。。。。。。放入錐形瓶中,加入。。。。mL蒸餾水,搖勻 3,滅菌
包扎、滅菌,烘干備用
3、 超凈臺中的操作(如上) 除了實驗步驟和結(jié)果,還要有討論和注意事項 例如:實驗討論: 1、評價該方法(操作簡易程度,靈敏度如何,適用性) 2、為何選擇細菌個數(shù)在30至300個之間的平皿數(shù)細菌的個數(shù)? 注意事項 比如各種儀器的使用注意事項,以及保持潔凈,防止染菌等。
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