— 37 —時間適當(dāng)。

3.4 提取方法的選擇 對隱丹參酮的提取方法，通過回流1 h、超聲提取10、20、30 min比較，結(jié)果超聲處理20 min，丹參酮的峰面積基本不變，且操作方便，故選用超聲處理20 min。

3.5 原標(biāo)準(zhǔn)中采用紫外-可見分光光度法對隱丹參酮進(jìn)行定量分析，操作繁瑣；本文建立了HPLC法對丹參酮膠囊中隱丹參酮進(jìn)行含量分析的方法，結(jié)果表明，該方法具有操作簡便、準(zhǔn)確，快速，重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。參考文獻(xiàn)

[1] 衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十七冊，19.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典（一部）[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，

2005，527.

3 討論

3.1 測定波長的選擇 取隱丹參酮對照品溶液，在200~400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示在263 nm處有較大吸收峰，且吸光度較強(qiáng)、不受溶劑峰干擾，故選擇263 nm處為測定吸光波長。

3.2 色譜柱的選擇 本文采用Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）和Thermo ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果用Thermo ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱分離效果好。

3.3 流動相的選擇 本文選用流動相甲醇-水系

75：25；80：20三個比統(tǒng)[2]，分別以70：30；

例試驗(yàn)，結(jié)果以75：25比例分離效果好，保留

HPLC-ELSD法測定阿拉伯糖的含量

劉 崢，崔小兵，李 偉*，徐智勇

（南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京，210029）

摘要：目的 建立高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定阿拉伯糖含量的方法。方法 采用SHISEIDO NH2分析色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）30 ℃，流動相：，柱溫：乙腈-水(70：30)，流速：0.8 mL/min，ELSD參數(shù)：漂移管溫度為80 ℃，N2流速為2.0 L/min。結(jié)果 阿拉伯糖在12.00~27.99 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9），平均回收率為100.4 %，RSD=0.8 %，定量限為200 μg/mL (S/N=10)。結(jié)論 HPLC-ELSD法簡便，快捷，無干擾，靈敏度高，重現(xiàn)性好，可用于阿拉伯糖的含量測定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法；阿拉伯糖；含量測定

R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1673-27(2008)06-0037-04 中圖分類號：

Determination of Arabinose by HPLC-ELSD

LIU Zheng, CUI Xiao-bing, LI Wei, XU Zhi-yong

(Nanjing University of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210029, China)

Abstract: Objective To establish a HPLC-ELSD method for the determination of arabinose. Methods The analytical column was SHISEIDO NH2(4.6 mm×250 mm,5 μm).The column temperature was 30℃.The mobile phase was acentonitrile-water (70：30). The flow rate was 0.8 mL/min. The samples were determined by an evaporative light-scattering detector (ELSD) with the drift tube temperature at 80 ℃ and the ? ow rate of nitrogen was 2.0 L/min. Results The linear range of arabinose was 12.00~27.99 μg(r=0.999 9). The average recovery was 100.4% with RSD of 0.8%. The limit of detection and quanti? cation for arabinose was 200 μg/mL(S/N=10). Conclusion The method is simple, accurate, sensitive and with good reproducibility. It can be used as the content control of arabinose.

Key words: HPLC-ELSD; arabinose; determination

收稿日期：2008-08-28*

通訊作者：李 偉，男，研究員，博士，Tel: (025)86798269，E-mail: liwaii@126.com

— 38 —蒸發(fā)光散射檢測器( ELSD)是一種新型質(zhì)量檢測器，利用光散射原理，其響應(yīng)與被測物的質(zhì)量成正比, 而不依賴于被測物的光學(xué)特性及官能團(tuán)[1]，同時具有高效、靈敏度高、專屬性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于無生色團(tuán)、無紫外線吸收或紫外末端吸收的樣品以及揮發(fā)性低于流動相的任何組分[2]。Pamita Bhandari[3]等采用HPLC-ELSD測定胡黃連屬中木糖、木糖醇、甘露醇、葡萄糖以及蔗糖的含量，根據(jù)ICH指南鑒證，此方法具有測定準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好、精密度高等優(yōu)點(diǎn)。

阿拉伯糖屬于五碳醛糖，以阿拉伯聚糖、阿拉伯糖基木聚糖、阿拉伯糖基半乳糖體及類似于高等植物半纖維的形式存在。它是一種沒有熱量的甜料，能抑制水解雙糖的酶，對蔗糖的代謝轉(zhuǎn)化有阻斷作用，因此，阿拉伯糖具有抑制肥胖、預(yù)防并治療糖尿病方面的功效，同時阿拉伯糖還可以用作醫(yī)藥中間體、用于生化領(lǐng)域中細(xì)菌培養(yǎng)基的制備以及香料合成等[4]。

阿拉伯糖本身不存在紫外吸收，迄今為止，有關(guān)阿拉伯糖含量測定的文獻(xiàn)報道較少。王曉雷[5]等曾采用3, 5-二羥基甲苯-三氯化鐵比色法測定黃芪多糖中阿拉伯糖的含量，本文首次運(yùn)用ELSD對阿拉伯糖樣品成分含量進(jìn)行HPLC分析，方法簡便、快捷、無干擾、重現(xiàn)性好、靈敏度高、專屬性強(qiáng)。1 儀器與試藥

1.1 高效液相色譜儀 Waters 515 HPLC 泵兩臺，717plus自動進(jìn)樣器，Millennium32色譜管

Alltech 500；電理系統(tǒng)；蒸發(fā)光散射檢測器：

Sartorius BP211D；阿拉伯糖對照子分析天平：

品（Exquim S.A. 批號 035061）；乙腈為色譜純(Dima Technology inc.批號84211)；水為重蒸餾水(自制)。

1.2 阿拉伯糖樣品的制備 采用阿拉伯膠提取法[6]

，阿拉伯膠在硫酸作用下水解得到含L-阿拉伯糖的混合液，乙醇萃取，工業(yè)乙酸沉淀，得阿拉伯糖粗品，通過微晶纖維素粉和硅膠填充的玻璃色譜柱，分離得阿拉伯糖樣品。2 色譜條件

SHISEIDO NH2分析色譜柱（4.6 色譜柱：

mm×250 mm, 5 μm），大連依利特科學(xué)儀器廠；

流速：0.8 mL/流動相：乙腈-水(70∶30)；

現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐2009年第23卷第1期

Research and Practice of Chinese Medicines

min；進(jìn)樣量：10 μL；ELSD 參數(shù)：漂移管溫度為80 ℃，N2流速為2.0 L/min。3 方法與結(jié)果

3.1 供試品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的阿拉伯糖樣品適量，溶于水中制成每1 mL含2.0 mg的溶液。

3.2 對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的阿拉伯糖對照品適量，溶于水中制成每1 mL含2.0 mg的溶液。

3.3 專屬性考察 取水進(jìn)樣，記錄色譜圖。在阿拉伯糖保留時間處無相應(yīng)的色譜峰（見圖1）。

注：a. 阿拉伯糖對照品 b. 樣品 c. 陰性對照 1. 阿拉伯糖

圖1 阿拉伯糖的HPLC圖譜

Fig .1 HPLC chromatogram of arabinose

3.4 線性關(guān)系考察 精密稱取阿拉伯糖對照品約400 mg，置于100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取上述溶液3、4、5、6、7 mL，分別至10 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，制得標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。取10 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖（見圖1b），測出阿拉伯糖峰面積（見表1）。以濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積的對數(shù)為縱坐標(biāo)作圖（見圖2），用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，得回歸方程

lgA = 1.218 3lgC + 2.912 3 , r= 0.999 9。進(jìn)樣為：

量在12.00~27.99 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

根據(jù)線性試驗(yàn)結(jié)果，確定含量測定所適用的高低濃度，本法采用測試濃度的80~120％為測試范圍。

3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取阿拉伯糖對照品溶液(1.999 mg/mL)10 μL注入色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣測定6次，測出阿拉伯糖主峰的峰面積。以峰面積的對數(shù)計(jì)算重復(fù)進(jìn)樣的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，

現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐2009年第23卷第1期Research and Practice of Chinese Medicines

— 39 —3.8 定量限考察 分別將對照品溶液逐步稀釋，并進(jìn)行測定，將信號與空白相對比，求出各色譜圖中的信噪比。以信噪比約為10時溶液的濃度為其定量限。結(jié)果可知阿拉伯糖的定量限為200 μg/mL。

3.9 重復(fù)性考察 精密吸取濃度為1.559 mg/mL、2.399 mg/mL阿拉伯糖對照品溶液10 μL，注入色譜儀測定，重復(fù)進(jìn)樣兩次，記錄色譜圖，測量主峰的峰面積，計(jì)算峰面積平均值的對數(shù)與濃度的對數(shù)。結(jié)果見表5。

表5 重復(fù)性試驗(yàn)隨行對照方程(n=2)

Tab.5 Controlled equation of randomised replicate test

Inj vol(μL)Cs(μg/mL)

10

12792879

A7245375699313012166080121306

lgA6.85247.0845

lgCs3.19293.3800

表1 線性試驗(yàn)結(jié)果(n=5) Tab.1 Results of linear test

No12345

C(μg/mL)12001559199923992799

lg C3.07903.19293.3009

A

45159984485048828638845663236166258496851480184527148588622

lgA6.6599 6.8009 6.9304

3.38001100748610738204106762837.0337 3.4470121052128018129243937.1107

圖2 阿拉伯糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.2 The standard curve arabinose

10

RSD=0.26%。說明本方法重現(xiàn)性良好。

3.6 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 精密吸取三份濃度為1.559 mg/mL、1.999 mg/mL、2.399 mg/mL阿拉伯糖對照品溶液10 μL，注入色譜儀測定，重復(fù)進(jìn)樣三次，測出主峰的峰面積，以峰面積的對數(shù)，從線性回歸方程計(jì)算其濃度，RSD=0.8%，見表3。

表3 準(zhǔn)確度測定結(jié)果（n=9）Tab.3 Results of accuracy test

NoCs(μg/mL)Inj vol(μL)Ci(μg/mL)回收率(%)平均值RSD(%)1234567

159912761235199920011995239924012849

101010101010101010

1620159514203620092015236724382374

101.27 99.53 100.37 100.88 100.81 100.42100.71 98.97 101.33 99.94

0.8

以峰面積平均值的對數(shù)與濃度的對數(shù)計(jì)算校

lgA = 1.240 8 lgC +2.0 4。 精密正曲線，得：

1.999 mg/mL、2.399 吸取三份濃度為1.559 mg/mL、

mg/mL阿拉伯糖對照品溶液10 μL，注入色譜儀測定，量出主峰的峰面積。從校正曲線計(jì)算出相

RSD=0.61%。見表6。，應(yīng)的濃度，計(jì)算含量（n=9）

表6 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（n=9）Tab.6 Results of replicate test

NoCs(μg/

mL)1234567

1552131538194019291923232823152308

Inj vol(μL)101010101010101010

A

lgA

Ci(μg/mL)

69739866.8435 153468529356.8359 151368582746.8362 151491021306.9591 190291347936.9607 190790981666.9590 1901115942857.02 2311115973437.04 2312112853487.0525 2261

含量(%)98.84 98.33 98.20 98.10 98.75 98.86 98.7199.30 99.90 98.13

0.61平均RSD值

(%)

3.7 穩(wěn)定性考察 供試品溶液每隔2 h取10 μL

注入色譜儀測定，重復(fù)進(jìn)樣兩次，以lgA計(jì)算RSD%為0.19%， 見表4。

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

時間(h)024681012

Tab.4 Results of stability testA78852844040880065697850363762148180174387930262

lgA6.68 6.92 6.9034 6.49 6.8820 6.9040 6.93

6.9010

0.19

lgA

RSD(%)

3.10 樣品測定 精密吸取三份濃度為1.599 mg/

mL、2.399 mg/mL阿拉伯糖對照品溶液10 μL以及三批樣品溶液10 μL，注入液相色譜儀測定（見圖1b、c），每份進(jìn)樣兩次，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算(n=3)，阿拉伯糖的含量結(jié)果見表7。

表7 含量測定結(jié)果 (n=3) Tab.7 Results of content determined批號080211080212080213

含量(%)98.2298.38.29

— 40 —4 討論

4.1 本試驗(yàn)選擇了不同的色譜條件對樣品進(jìn)行測定，證明本方法的耐用性良好。通過改變柱溫 (分

35 ℃)、別為25 ℃，改變流動相比例乙腈-水(分

別為75:25，65:35)、改變檢測器漂移管溫度（分別為76 ℃，84 ℃）、改變檢測器氣流（分別為1.8 L/mL 、2.2 L/mL），其他色譜條件不變，進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，色譜分離無明顯影響。

4.2 糖類成分多不存在紫外吸收,以前主要采用分光光度法對這類成分進(jìn)行定量分析,但只能測定總糖含量，選擇性、準(zhǔn)確度較差[7]。本文用高效液相色譜-蒸發(fā)光閃射檢測器法測定阿拉伯糖的含量，進(jìn)行了準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、線性、穩(wěn)定性以及耐用性考察，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確度高、專屬性強(qiáng)，精密度及穩(wěn)定性均較好，能客觀反映阿拉伯糖的含量，對分析方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證，可作為該糖的含量測定方法，同時也可作

現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐2009年第23卷第1期Research and Practice of Chinese Medicines

為其他糖類含量測定的參考。ELSD雖然不可能完全的替代UV 檢測器,但是對于糖類成分的分析發(fā)揮了重要作用。參考文獻(xiàn)

[1] 黃永焯, 王寧生. HPLC-ELSD在天然藥物分析中的應(yīng)用[J]. 中藥新藥與

臨床藥理, 2001, 12(6): 444.

[2] 馬艷蓉, 柴國林, 張蒞峽. HPLC-ELSD在中藥分析中的應(yīng)用[J]. 中國中

醫(yī)藥信息雜志, 2004, 11(4): 368.

[3] P Bhandari, N Kumar, B Singh, et al. Simultaneous determination of sugars

and picrosides in Picrorhiza species using ultrasonic extraction and high-performance liquid chromatography with evaporative light scattering detection. Journal of Chromatography A, 2008 (1194): 257.[4] 秦海敏, 喻宗沅, 容如濱. L-阿拉伯糖研究進(jìn)展[J]. 化學(xué)與生物工程,

2006, 23(2):50.

[5] 王曉雷, 徐夢丹. 黃芪多糖中阿拉伯糖含量的測定[J]. 中成藥, 2003,

25(11): 925.

[6] 馮亞青, 劉 燕, 張曉東等. 從L-阿拉伯膠提取L-阿拉伯糖[J]. 精細(xì)化工,

2003, 20(5):288.

[7] 趙宇新, 李曼玲. 蒸發(fā)光散射檢測器在中藥成分分析中的應(yīng)用[J]. 中國

中藥雜志, 2003, 28(10): 914.

益智不同部位低聚糖的含量測定

汪金玉，陳 康，林 勵，廖慧君

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006）

摘要：目的 初步比較益智不同部位低聚糖含量的區(qū)別。方法 以果糖對照，按紫外分光光度法在285 nm處測定吸收度。 結(jié)果 在0~60 μg?mL -1范圍內(nèi)，果糖濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系（R2=0.999 9），殼和仁的平均加樣回收率分別為100.69%和99.20%（RSD分別為1.49%和1.25%，n=6）。結(jié)論 該測定方法簡便、快速、重現(xiàn)性好，益智果殼和果仁低聚糖含量區(qū)別明顯。

關(guān)鍵詞：益智；不同部位；低聚糖；含量測定；紫外分光光度法

R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1673-27(2009)01-0040-03中圖分類號：

Determination of Oligosaccharides in the Different Parts of Alpinia oxyphylla

WANG Jin-yu, CHEN Kang, LIN Li, LIAO Hui-jun

(College of Chinese Medicine,Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510006,China)

Abstract：Objective To compare the content of oligosaccharides in different parts of Alpinia oxyphylla. Methods Using fructose as a reference substance, to analyze absorption by UV-spectrophotometry with a detection wavelength at 285 nm. Results Good linear relationship with absorbability occurred when the concentration range of fructose was 0~60 μg?mL -1 (R2=0.999 9). The average recovery of shell and nutlet were 100.69% and 99.20% with RSD of 1.49% and 1.25% (n=6) , respectively. Conclusion The method is simple, quick and sensitive, the content of oligosaccharides is different between shell and nutlet of Alpinia oxyphylla.

Key words：Alpinia oxyphylla Miq．；different parts；oligosaccharides；determination；UV-spectrophotometry

收稿日期：2008-08-29