(1) 接通電腦及打印機(jī)電源,進(jìn)入Windows操作系統(tǒng)。
(2) 接通光度計(jì)左側(cè)電源開關(guān)(POWER)約5秒鐘后主機(jī)右上方綠色氙燈指示燈點(diǎn)亮,
表示氙燈已經(jīng)啟輝工作。
(3) 雙擊電腦屏幕上FL Solutions 熒光分析快捷框,進(jìn)入儀器操作界面。
<二> 關(guān)機(jī)順序:
(4) 使用儀器操作軟件退出操作系統(tǒng)并關(guān)閉氙燈。
(5) 保持主機(jī)通電10分鐘以上最后關(guān)閉主機(jī)電源開關(guān)。(目的是讓燈室充分散熱)
<三> 波長(zhǎng)掃描的簡(jiǎn)易操作:(Wavelength Scan)
點(diǎn)擊快捷欄“Method” 后,立即顯示了分析方法(Analysis Method)的五個(gè)模塊界面,分別為“常規(guī)”(General),“儀器條件”(Instrument),“監(jiān)視界面”(Monitor),“處理”(Processing),“報(bào)告”(Report)。下面詳細(xì)介紹每個(gè)界面: (1)General (常規(guī))
*Measurement(測(cè)量方式)--------選擇Wavelength (波長(zhǎng)掃描) *Operator (操作者名)---------鍵入操作者性名 *Insturment (儀器型號(hào)) ----------自動(dòng)給出
*Sampling (進(jìn)樣器類型) -------選用自動(dòng)進(jìn)樣器后該項(xiàng)自動(dòng)指定 *Comments (注釋表)-----------可輸入簡(jiǎn)單注釋說(shuō)明 *?? Use sample table(使用樣品表)---- (2) Instrument (儀器條件)
*Scan mode (掃描方式) ---------- Excitation (激發(fā)波長(zhǎng)掃描)
Emission(發(fā)射波長(zhǎng)掃描) Synchronous(同步掃描)
*Data mode (數(shù)據(jù)方式)---------Fluorescence (熒光采集) Luminescence (發(fā)光采集) Phosphorescence(磷光采集) *EM WL (發(fā)射波長(zhǎng))------------輸入范圍 0nm, 200nm~900nm *EX Start WL (激發(fā)起始波長(zhǎng))---- 輸入范圍 200nm~0nm *EX End WL (激發(fā)終止波長(zhǎng))-----輸入范圍 210nm~900nm * EX WL (激發(fā)波長(zhǎng))-------------輸入范圍 0nm, 200nm~900nm *EM Start WL (發(fā)射起始波長(zhǎng))-----輸入范圍 200nm~0nm *EM End WL (發(fā)射終止波長(zhǎng))-----輸入范圍 210nm~900nm
*Scan speed (掃描速度)-----------30,60,240,1200,2400,12000,30000,60000nm/min
八擋可選(磷光掃描僅有三擋:30,60,240nm/min) *Delay (延遲時(shí)間)----------輸入范圍 0~9999秒(重復(fù)測(cè)量時(shí)僅對(duì)第一次測(cè)量有效) *EX Slit (激發(fā)單元狹縫)-----------1, 2.5 ,5, 10, 20,五擋可選。 *EM Slit (發(fā)射單元狹縫)-----------1, 2.5, 5, 10, 20五擋可選。 *PMT Voltage(光電管負(fù)高壓)---------250V,400V, 700V, 950V四擋固定電壓可選。 *?? PMT Voltage (光電管負(fù)高壓)---------當(dāng)此項(xiàng)選定后,可在0~1000V之間任意設(shè)定。 *Response (響應(yīng)速度)------------0.002,0.004,0.01,0.05,0.1,0.5,2.0,4.0,8.0秒和Auto
共有十擋可選。響應(yīng)速度快峰形分辨率高,但噪音大。速度慢反之。通常選Auto。 *Corrected spectra (光譜校正)--------使用副標(biāo)準(zhǔn)光源附件進(jìn)行長(zhǎng)波長(zhǎng)光譜校正。
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*?? shutter control(光閘控制)----------選定后,在不測(cè)樣品時(shí),激發(fā)光不能照射到樣品上。 *Replicates (重復(fù)次數(shù))------------可在1~99之間選擇。(重復(fù)掃描用)
*Cycle time (循環(huán)間隔)------------兩次掃描的間隔時(shí)間的設(shè)定,可在0~180分鐘范圍選擇。 (3) Monitor (模擬監(jiān)視)
*Y-Axis Max (縱軸標(biāo)尺上限值)---- 一般樣品預(yù)掃描后儀器自動(dòng)賦值。 *Y-Axis Min (縱軸標(biāo)尺上限值)----- 根據(jù)需要賦值。
*5 Open data processing window after data acquisition(測(cè)量后打開數(shù)據(jù)處理窗口)
一般選定5,測(cè)定結(jié)果可自動(dòng)存儲(chǔ),便于后期處理。
*?? Print report after data acquisition (數(shù)據(jù)采集后自動(dòng)打?。?-- 一般不選定。
*Overlay(重疊光譜圖)-----可將光譜圖重疊在監(jiān)視畫面上但重復(fù)掃描時(shí)不可設(shè)定。 (4) Processing (處理方法)
簡(jiǎn)介:此界面主要是對(duì)已測(cè)定的圖譜根據(jù)用戶的要求進(jìn)行選擇處理。
*?? CAT (平均化)-------- 如選定則對(duì)重復(fù)測(cè)定的圖譜進(jìn)行平均處理。 *Processing choices (處理方法的選擇)----- 有如下四種處理方法: 1) Savitsky-Golay Smooth( ) 2)Mean Smooth (平均平滑) 3) Median Smooth (中間平滑) 4) Derivative (微分求導(dǎo)) *Processing steps (處理步驟)---------- *Peak Finding (峰檢出) ----------- 有如下三項(xiàng)內(nèi)容:
1)Integration method (積分方法)----- a) Rectangnlar (矩形) ,b) Trapezoid (梯形)
c) Romberg(羅伯格方式)
2)Threshold (閾值)----------決定信號(hào)峰的舍取。賦值范圍0.001-1000。
小于賦值的峰可以顯示但不打印結(jié)果。
3)Sensitivity (靈敏度)------ 可改變放大器的放大倍數(shù)。一般設(shè)置為“1”。 (5) Report (報(bào)告格式)
*Output (輸出)----------------------有如下三種格式可選:
① Print Report --------------------- 打印報(bào)告(常用格式) ② Use Microsoft Excel ------------將數(shù)據(jù)變換為微軟Excel 格式。 ③ Use print generator sheet------ 利用變換器(附選件)打印圖表。
*Orientati (打印方向)-------------橫向 (Portrait),縱向 (Landscape) *Pintable items (打印選項(xiàng))------ 有五種項(xiàng)目可選:
① Include data (打印數(shù)據(jù)) ② Include method (打印方法) ③ Include graph (打印圖譜)
④ Include data listing (打印數(shù)據(jù)表)---如果選定此項(xiàng)后,會(huì)顯示右側(cè)的打印數(shù)據(jù)
列表[Include data listing]功能,有固定數(shù)據(jù)間隔[constant] 和選擇數(shù)據(jù)間隔[Select data]兩種類型的選擇。 ⑤ Include peak table (打印峰值表)
*Printer Font (打印機(jī)字形)--------- 可改變報(bào)告的打印字形。
<四> 時(shí)間掃描的簡(jiǎn)單操作: (Time Scan)
簡(jiǎn)介:此掃描方式是EX,EM的波長(zhǎng)均固定,僅觀察樣品隨時(shí)間的變化。監(jiān)視畫面的 橫坐標(biāo)軸為時(shí)間單位。進(jìn)入方法與波長(zhǎng)掃描相同。
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(1) General (常規(guī))
*Measurement (測(cè)量方式)--------選擇 Time Scan (時(shí)間掃描)
(其它內(nèi)容與波長(zhǎng)掃描相同,故從略。)
(2)Instrument (儀器條件)
*Data mode (數(shù)據(jù)方式)-----Fluorescence(熒光采集),Luminescence (發(fā)光采集)
Phosphorescence(磷光采集) Phosphorescence Life Time(磷光壽命采集) Phosphorescence Life Time (Shoet)(磷光短壽命采集)
注:如果選擇磷光短壽命采集方式,時(shí)間單位為ms,采集時(shí)間自動(dòng)設(shè)定為20ms。
*EX WL (激發(fā)波長(zhǎng))------ 0nm,200nm~900nm 設(shè)定 *EM WL (發(fā)射波長(zhǎng))------ 0nm,200nm~900nm 設(shè)定 *Time unit (時(shí)間單位)------ ------s和ms 兩種單位可設(shè)定
*Scan (掃描周期)------ 當(dāng)時(shí)間單位為sec時(shí), 周期范圍為:10~9000sec;
當(dāng)時(shí)間單位為msec時(shí),周期范圍為:100~9999msec。
*EX Slit (激發(fā)單元狹縫)-----------1, 2.5 ,5, 10, 20,五擋可選。 *EM Slit (發(fā)射單元狹縫)-----------1, 2.5, 5, 10, 20五擋可選。
*PMT Voltage(光電管負(fù)高壓)---------250V,400V, 700V, 950V四擋固定電壓可選。 *?? PMT Voltage (光電管負(fù)高壓)---------當(dāng)此項(xiàng)選定后,可在0~1000V之間任意設(shè)定。 *Response (響應(yīng)速度)------------0.002,0.004,0.01,0.05,0.1,0.5,2.0,4.0,8.0秒共九檔。 *?? shutter control(光閘控制)----------選定后,在不測(cè)樣品時(shí),激發(fā)光不能照射到樣品上。 *Replicates (重復(fù)次數(shù))-----------可在1~99之間選擇。(重復(fù)掃描用)
*Cycle time (循環(huán)間隔)-----------兩次掃描的間隔時(shí)間的設(shè)定,可在0~180分間選擇。 *?? Stopped Flow (外部控制測(cè)量)---選定后,按下測(cè)量鈕后,等待外部控制信號(hào)啟動(dòng)測(cè)量。 (3) Monitor (模擬監(jiān)視)
*Y-Axis (縱軸上下限值)----- 一般樣品預(yù)掃描后儀器自動(dòng)賦值。 *X-Axis (橫軸上下限值)------時(shí)間軸, 根據(jù)需要設(shè)定
(其它內(nèi)容與波長(zhǎng)掃描相同,故從略。)
(4) Processing (處理方法)----- 內(nèi)容與波長(zhǎng)掃描相同,從略 (5) Report (報(bào)告格式)---- 內(nèi)容與波長(zhǎng)掃描相同,從略
<五> 光度計(jì)法的簡(jiǎn)單操作: (PHOTOMETRY)
簡(jiǎn) 介:光度計(jì)法亦稱濃度直讀法,也稱工作曲線法。利用配制的具有梯度的標(biāo)準(zhǔn)樣品,先做出一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后再反測(cè)未知樣品。 (1) General (常規(guī))
*Measurement (測(cè)量方式)-------選擇 Photometry(光度計(jì))
(其它內(nèi)容與波長(zhǎng)掃描相同,故從略。)
(2) Quantitation (定量條件)
*Quantitation type (測(cè)量類型)------ ① Wavelength (指定波長(zhǎng)) ② Peak area(峰面積) ③ Peak height (峰高) ,④ Derivative(導(dǎo)數(shù)),⑤ Ratio (比率)。 *Calibration type (曲線校正類型)------- ① None(沒有),② 1 st order (線性方程)
③ 2nd order (二次方程), ④ 3 rd order (三次方程),⑤ Segmented(折線) *Num ber of wavelengths (波長(zhǎng)數(shù))-----當(dāng)曲線校正選擇“None” 時(shí)波長(zhǎng)數(shù)可以在1~6間選擇,但再不能使用工作曲線法了。其他校正類型只能在1~3間選擇,但此時(shí)的波長(zhǎng)數(shù)并不表示在若干波長(zhǎng)值下可以同時(shí)測(cè)定樣品的吸光度,僅僅是對(duì)光譜圖的一種處理方法。
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*Concentration unit (濃度單位)---------- 根據(jù)需要格式設(shè)定 *Manual calibration(手動(dòng)校正)------ 根據(jù)公式校正 *Force curve through zero (強(qiáng)制曲線歸零)
*Digit after decimal point (小數(shù)有效位)---可以在1~3間賦值 (3)Instrument (儀器條件) *Data mode (數(shù)據(jù)方式)----------- Fluorescence (熒光采集), Luminescence (發(fā)光采集)
Phosphorescence(磷光采集) *Wavelength mode (波長(zhǎng)方式)----- EX WL Fixed(激發(fā)波長(zhǎng)固定)
EM WL Fixed(發(fā)射波長(zhǎng)固定),Both WL Fixed(兩側(cè)均固定)
*Fixed WL (波長(zhǎng)選定)--------- 可以選定1–6個(gè)波長(zhǎng)值,波長(zhǎng)值賦值范圍0nm,200~900nm。*EX Slit (激發(fā)單元狹縫)----- 設(shè)定范圍2.5, 5.0, 10.0,nm
*EM Slit (發(fā)射單元狹縫)----- 設(shè)定范圍2.5, 5.0, 10.0, 20.0nm *PMT Voltage (光電管高壓)------- 設(shè)定范圍 400V, 700V ,950V
*Auto statistic cal.number (自動(dòng)統(tǒng)計(jì)計(jì)算)----可以進(jìn)行平均值,標(biāo)準(zhǔn)偏差,
變異系數(shù)的計(jì)算。為此目的則要設(shè)置樣品重復(fù)個(gè)數(shù),此數(shù)在2-4000間選擇。 *Replicates (重復(fù)次數(shù))------ 重復(fù)測(cè)量次數(shù),輸入范圍1-20。 *Integration Time (積分時(shí)間)----- 0.1~10.0秒間設(shè)定。
*Delay (延遲時(shí)間)-------啟動(dòng)后經(jīng)過(guò)所設(shè)定的時(shí)間自動(dòng)開始測(cè)量。 (4) Standards (標(biāo)準(zhǔn)樣品表) *Number of Samples (標(biāo)準(zhǔn)樣品數(shù)目的設(shè)定)------ 1~20間設(shè)定。
*Update (修定確認(rèn))-------當(dāng)標(biāo)樣數(shù)確定后,點(diǎn)擊此框后顯示標(biāo)樣表以供賦值。 *Insert (插 入)---------- 點(diǎn)擊此框可臨時(shí)插入一個(gè)標(biāo)樣條目。 *Delete (刪 除)--------- 點(diǎn)擊此框可臨時(shí)刪除一個(gè)標(biāo)樣條目。 (5) Monitor (監(jiān)視界面) 同前述相同,故從略。 (6) Report (報(bào)告形式)同前述相同,故從略。
注:標(biāo)樣測(cè)量點(diǎn)擊Measure框,未知樣品測(cè)量點(diǎn)擊F4鍵,結(jié)束測(cè)量點(diǎn)擊F9鍵。
<六> 三維掃描的簡(jiǎn)易操作 ( 3-D SCAN )
說(shuō) 明:該功能的作用是,當(dāng)某個(gè)樣品不知最佳激發(fā)波長(zhǎng)和最佳發(fā)射波長(zhǎng)時(shí),利用該功能 可自動(dòng)快速地給出最佳條件。并可供其他特殊分析用。 (1)General (常規(guī))
*Measurement (測(cè)量方式)-------------- 選擇 3—D Scan 方式。 (2)Instrument (儀器條件)
*Data mode (數(shù)據(jù)方式)----------可選擇Fluorescence熒光或Phosphorescence磷光。 *Chopping speed (切光器轉(zhuǎn)速)---使用磷光測(cè)定時(shí)用,有10Hz,20Hz,40Hz三檔可選。 *EX Start WL (激發(fā)起始波長(zhǎng))--------- 0nm, 200nm~850nm間選擇。 *EX end WL (激發(fā)終止波長(zhǎng))-----------0nm, 200nm~900nm間選擇。 *EX Sampling interval (激發(fā)掃描間距)----- 1~50nm間選擇。
*EM Start WL (發(fā)射起始波長(zhǎng))-------- 0nm, 200nm~850nm間選擇。 *EM end WL (發(fā)射終止波長(zhǎng))--------- 0nm, 200nm~900nm間選擇。 *EM Sampling interval (發(fā)射掃描間距)---- 1~10nm間選擇。
*Scan speed (掃描速度)-------- 30,60,240,1200,2400,12000,30000,60000nm/min八擋可選。 (磷光掃描僅有三擋:30,60,240nm/min)
(3)Monitor (模擬監(jiān)視) ,(4) Processing (數(shù)據(jù)處理) (5) Processing (數(shù)據(jù)處理) 從略。
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