RNA的提取及凝膠電泳檢測實(shí)驗(yàn)心得體會

RNA的提取注意事項(xiàng)

1.一定要注意冰上操作，低溫離心。

2.戴口罩和勤換手套，去任何東西都要帶著手套去取。

3.每次去器材的時候都要用鑷子去夾，鑷子要在酒精燈上燒一下。 4.所有的器材都要經(jīng)過DEPC浸泡后高壓后才可以使用，所需要的氯仿，酒精，異丙醇等都保證沒有被RNA酶污染，不能用沒有泡過DEPC的頭去提取液體，一定要用DEPC浸泡過的頭去吸，如果發(fā)現(xiàn)試劑有可能被污染了，要立即更換。

5.吸取上清一定不要吸到中間層的蛋白，如果吸到蛋白一定要重新用氯仿抽提，因?yàn)?，吸到的蛋白很可能會對RNA產(chǎn)生降解作用。一定要少吸，不要貪多，RNA提取不要求量，更多的要求質(zhì)。

6.最后用75%的酒精洗一次就可以，盡量減少RNA提取時間。 7.最后一步，用DEPC水溶解RNA，不要用太多的體積，以保證RNA的濃度。

8.提取完后，電泳觀察結(jié)果，如果上面的兩條帶都比較清楚的話，說明RNA提取的不錯，可以一次多逆轉(zhuǎn)錄幾管，不要把RNA凍存，以后在逆轉(zhuǎn)錄的效果不好。

凝膠電泳檢測實(shí)驗(yàn)心得體會

凝膠電泳常用方法是瓊脂糖凝膠電泳方法，這是用瓊脂糖作支持

介質(zhì)的一種電泳方法。其分析原理與其他支持物電泳的最主要區(qū)別是：它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。

瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，物質(zhì)分子通過時會受到阻力，大分子物質(zhì)在涌動時受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量，而且還取決于分子大小，這就大大提高了分辨能力。但由于其孔徑相當(dāng)大，對大多數(shù)蛋白質(zhì)來說其分子篩效應(yīng)微不足道，現(xiàn)廣泛應(yīng)用于核酸的研究中。蛋白質(zhì)和核酸會根據(jù)pH不同帶有不同電荷，在電場中受力大小不同，因此跑的速度不同，根據(jù)這個原理可將其分開。電泳緩沖液的pH在6-9之間，離子強(qiáng)度0.02-0.05為最適。常用1%的瓊脂糖作為電泳支持物。瓊脂糖凝膠約可區(qū)分相差100bp的DNA片段，其分辨率雖比聚丙烯酰胺凝膠低，但它制備容易，分離范圍廣。普通瓊脂糖凝膠分離DNA的范圍為0.2-20kb，利用脈沖電泳，可分離高達(dá)107bp的DNA片段。