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2008年江蘇省局部地區(qū)煙粉虱生物型調(diào)查

來源:九壹網(wǎng)
?2l6 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)(Jiangsu?。铮妗。纭。樱悖椋?,2012,28(1):216~218 周曉偉,譚永安,徐德進(jìn),等.2008年江蘇省局部地區(qū)煙粉虱生物型調(diào)查[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2012,28(1):216.218 2008年江蘇省局部地區(qū)煙粉虱生物型調(diào)查 周曉偉 一, 譚永安 , 徐德進(jìn) , 季英華 , 柏立新 , 周益軍?。ǎ保暇煼洞髮W(xué)生命科學(xué)學(xué)院,江蘇南京210046;2.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所,江蘇南京210014) 關(guān)鍵詞:煙粉虱;細(xì)胞色素氧化酶I(CO1);Q型 中圖分類號:¥433.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:1000-4440(2012)01-0216-03?。桑睿觯澹螅簦椋纾幔簦椋铮睢。铮妗。拢澹恚椋螅椋帷。簦幔猓幔悖椤。猓椋铮簦穑濉。椋睢。穑幔颍簦椋幔臁。幔颍澹帷。铮妗。剩椋幔睿纾螅酢。校颍铮觯椋睿悖濉。椋睢。玻埃埃浮。冢龋希铡。兀椋幔铩鳎澹椤。?,TAN?。伲铮睿纭幔睢。兀铡。模澹辏椋睢?,JI?。伲椋睿纾瑁酰帷。拢粒伞。蹋椤。椋睢?,ZHOU Yi-jun?。ǎ保茫铮欤欤澹纾濉。铮妫蹋椋妫濉。樱悖椋澹睿悖澹螅危幔睿辏椋睿纭。危铮颍恚幔臁。眨睿椋觯澹颍螅椋簦?,Nanjing?。玻保埃埃矗?,China;2.Institute?。铮妫校欤幔睿簟。校颍铮簦澹悖簦椋铮睿。埃。汀。粒悖幔洌澹恚。铮妫粒纾颍椋悖酰欤簦酰颍幔臁。樱悖椤。澹鳎澹?,?。睿辏椋睿纭。玻保埃埃保?,China) Key words:Bemisia?。簦幔猓幔悖椋唬悖簦铮悖瑁颍铮恚濉。铮椋洌幔螅濉。桑ǎ茫希保?;Q biotype 煙粉虱[Bemisia?。簦幔猓幔悖椋ǎ牵澹睿睿幔洌椋酰螅菔且环N重要的農(nóng)業(yè)?。模危羶?nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)1(rDNA ITS1)標(biāo)記、線粒體DNA細(xì)胞色 素氧化酶I(mtDNA?。茫希保?biāo)記、微衛(wèi)星(SSR)標(biāo)記等,其中 mtDNA因其具有數(shù)量豐富、分子量較小、進(jìn)化速度相對較快 等特點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于煙粉虱生物型鑒定等研究上。在江 蘇,早在2001年周福才等就對煙粉虱生物型進(jìn)行了研究,發(fā) 現(xiàn)有B型煙粉虱的危害?。欤稀。?;2005~2006年沈媛等在進(jìn)行調(diào) 害蟲,分布于熱帶、亞熱帶及相鄰溫帶等地區(qū)…。近年來隨 著全球氣候變暖及世界各地之間貿(mào)易交流的頻繁,煙粉虱大 范圍擴(kuò)散蔓延,目前已成為一種世界范圍內(nèi)發(fā)生的災(zāi)害性害 蟲 。煙粉虱的寄主范圍非常廣泛,危害方式也呈現(xiàn)多樣 化,既可以吸取植物汁液直接造成危害,又可以分泌蜜露等 導(dǎo)致煤污病,更為嚴(yán)重的是它可以傳播多種植物病毒,導(dǎo)致 植物病毒病,危害尤甚?。省!『芏鄬<艺J(rèn)為煙粉虱是一個(gè)復(fù)合種群(Species con—?。穑欤澹壳爸辽賱澐譃椋玻磦€(gè)生物型,其中以B、Q型較為?!〔闀r(shí)發(fā)現(xiàn)江蘇省不僅存在B型煙粉虱,Q型煙粉虱也有發(fā) 生,主要分布在蘇南沿海地區(qū),且呈由南向北擴(kuò)散的趨 勢…。 自2007年來,以番茄黃化曲葉病毒為代表的雙生病毒 見 。不同生物型的煙粉虱在地理分布、傳毒能力、抗藥 在江蘇省蔓延危害,給當(dāng)?shù)氐姆训仁卟俗魑锷a(chǎn)造成了嚴(yán) 重的威脅 ” 。煙粉虱作為該病毒的主要傳播介體,對其 生物型展開調(diào)查不僅有助于明確江蘇省煙粉虱生物型的分 布,同時(shí)也為番茄黃化曲葉病的防治提供更為明確的目標(biāo), 為研究番茄黃化曲葉病毒的致病機(jī)制及成災(zāi)機(jī)理奠定基礎(chǔ)?!⌒?、寄主?;浴⑦z傳機(jī)制等方面存在差異,如B型比A型 煙粉虱平均交配持續(xù)時(shí)間短 、卵發(fā)育速度快?。?、更易產(chǎn)生 抗藥性 等等。目前在煙粉虱生物型劃分上有很多方法,如 生物學(xué)鑒定、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)標(biāo)記、核糖體?。辈牧吓c方法 收稿日期:2011-04—11 基金項(xiàng)目:江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新基金項(xiàng)目[CX(10)207、CX(10)?。保辈牧稀。矗保?、CX(10)416、CX(09)615];公益性行業(yè)科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi) 項(xiàng)目(201003065) 煙粉虱于2008年底采自江蘇省內(nèi)番茄、辣椒、煙草、黃 瓜等作物上?!。保矡煼凼偅模危撂崛 ∽髡吆喗椋褐軙詡ィǎ保梗福叮?,男,江蘇鹽城人,碩士研究生,主要從事植 物病害防治?!⊥ㄓ嵶髡撸褐芤孳姡ǎ裕澹保希玻担撸福矗常梗埃常梗?;(E—mail)yjzhou@jaas.ac.crl 單頭煙粉虱成蟲經(jīng)ddH:O清洗后用濾紙吸干,參照羅 晨等 的方法提取DNA。 周曉偉等:2008年江蘇省局部地區(qū)煙粉虱生物型調(diào)查?。玻保贰。保碂煼凼茫希被虻模校茫覕U(kuò)增 采用CO/的通用引物?。茫币唬剩玻保梗担ǎ怠∫弧。颍颍牵粒保撸散觯祝恰。牵裕茫粒裕茫茫粒牵粒粒牵砸唬场。┖停蹋惨唬我唬常埃保矗ǎ怠∫唬裕茫茫粒粒裕牵茫粒茫裕痢。粒裕茫裕牵茫茫粒裕粒裕桑В粒场。┻M(jìn)行PCR擴(kuò)增,PCR反應(yīng)在Eppendoff 熱循環(huán)儀中進(jìn)行。PCR反應(yīng)體系包含DNA(20?。睿纾簦保常啊。?、上游和下游引物(10 txmol/L)各1.5?。簦?、10xBuffer(Mg“)?。玻怠。簦臁ⅲ洌危裕校ǎ保啊。恚恚铮欤蹋埃怠。桑?、Taq(TaKaRa)(5?。眨桑桑埃怠。臁ⅲ洌洌取。稀。保担怠。桑臁#校茫覘l件為95?。悖泐A(yù)變性5?。恚椋睿唬梗怠。铮米儭⌒裕担啊。?,52?。铮猛嘶穑担啊。螅罚病。铮醚由欤臁。恚椋?,循環(huán)35次;最后72 ℃延伸10?。恚椋睢!。校茫耶a(chǎn)物于1.0%的瓊脂糖凝膠上電泳檢測(120 V,?。埃担裕拢牛寤义V(EB)染色后,在Bio—Rad?。牵澹臁。模铮恪。牛涯∧z成像系統(tǒng)下觀察并拍照記錄結(jié)果?!。保葱蛄袦y定 選取代表性樣品的PCR產(chǎn)物割膠回收后,進(jìn)行序列測 定,測序由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司完成?!。保敌蛄蟹治觥±茫拢蹋粒樱裕ǎ危茫拢删W(wǎng)站)、Clustal X和DNAStar軟件對?。模危列蛄羞M(jìn)行比對及同源性分析,利用MEGA4對序列進(jìn)行 系統(tǒng)發(fā)育分析,系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建采用Kimura?。玻校幔颍幔恚澹簦澹颉∧P停ⅲ危剩ǎ危澹椋纾瑁猓铮颉剩铮椋睿椋睿纾?,各個(gè)分支的Bootstrap置 信度用1?。埃埃按巫詫?dǎo)復(fù)制來評價(jià)?!。步Y(jié)果?。玻睙煼凼茫希被虻模校茫覕U(kuò)增 利用CO1通用引物,從采集的煙粉虱總DNA中都擴(kuò)增 到了CO1基因(圖1),其長度為850 bp左右?!。汀。薄。病。场。础。怠。丁。贰。浮。埂。保啊。薄。埃埃埃猓稹。罚担埃猓稹。停悍肿恿繀⒄眨唬薄保埃簾煼凼瓨悠罚暇?,棉花)?!D1 CO1基因片段的PCR擴(kuò)增?。疲椋纾薄。粒恚穑欤椋椋妫悖幔簦椋铮睢。铮妗。茫希薄。纾澹睿濉。猓。校茫摇。玻矡煼凼茫希被蛐蛄斜容^與同源性分析 從CO1基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中選取23個(gè)代表性樣品 進(jìn)行割膠回收并測定序列,測序樣品覆蓋江蘇?。秱€(gè)地區(qū)?。暇⒊V?、蘇州、興化、淮安、徐州)、5種作物(棉花、煙草、 番茄、辣椒、黃瓜)?!?yīng)用DNAStar軟件對測定的23個(gè)煙粉虱CO/基因片段 序列進(jìn)行比對分析,發(fā)現(xiàn)其核苷酸序列間的同源性非常高 (99.1%~100.0%),暗示其可能屬于同一生物型。 將測定的23個(gè)CO/基因片段序列及GenBank上已公布 的煙粉虱相關(guān)CO/序列進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析,以溫室白粉虱?。ǎ粒疲矗保福叮罚玻橥馊?,利用MEGA4軟件,采用Kimura?。玻校幔。颍幔恚澹簦澹蚰P停ⅲ危蕵?。由構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹可以看出, 本研究所測定的23份樣品CO/基因核苷酸序列與與美國、 西班牙、日本、摩洛哥、蘇丹、法國及中國浙江、沈陽等地區(qū)的?。研蜔煼凼茫希蚝塑账嵝蛄型葱宰罱?,共同聚于一個(gè) 分枝,說明本研究所采集的江蘇省內(nèi)煙粉虱的生物型全部為?。研??!。秤懻摗〗陙?,以番茄黃化曲葉病毒為代表的粉虱傳雙生病毒 在中國很多番茄產(chǎn)區(qū)發(fā)生危害,給當(dāng)?shù)氐姆焉a(chǎn)造成了嚴(yán) 重的損失。煙粉虱為這類病毒的主要傳播介體,對其開展研 究有著特殊的意義?!≡诮K省內(nèi),早在2005年無錫、興化等地番茄日光溫室 就出現(xiàn)番茄黃化曲葉病的疑似病株,2007年經(jīng)確認(rèn)興化發(fā) 現(xiàn)番茄黃化曲葉病危害?。保常?,2008年南京、蘇州、常州、徐州、 泰州、鹽城等地均出現(xiàn)該病危害?。保玻?,2009年,該病繼續(xù)擴(kuò)散 蔓延,整個(gè)江蘇省幾乎所有番茄種植區(qū)都有該病發(fā)生,嚴(yán)重 的棚室造成絕產(chǎn)絕收。而對于煙粉虱,早在2000年左右,江 蘇省就發(fā)現(xiàn)B型煙粉虱 ,2005~2006年的調(diào)查結(jié)果顯示 在江蘇?。滦秃停研蜔煼凼加邪l(fā)生分布,在一些地區(qū)Q 型煙粉虱有上升的趨勢 ,2008年我們對番茄黃化曲葉病 毒 和煙粉虱生物型同步進(jìn)行的調(diào)查結(jié)果顯示當(dāng)前檢測到 的全部是Q型煙粉虱。江蘇省內(nèi)的番茄黃化曲葉病的發(fā)生 態(tài)勢與Q型煙粉虱的擴(kuò)散蔓延趨勢相似,暗示Q型煙粉虱 的擴(kuò)散和番茄黃化曲葉病的大發(fā)生有著某種聯(lián)系。但是,作 為兩種外來人侵生物,它們的擴(kuò)散蔓延會受到諸多外界因素 的影響,因此現(xiàn)在斷言Q型煙粉虱的擴(kuò)散蔓延是近年來番 茄黃化曲葉病在江蘇省乃至中國大范圍發(fā)生危害的關(guān)鍵因 素還缺少充分的證據(jù)?!。研蜔煼凼植加诘刂泻V苓厙遥牵滦蜔煼凼摹〗壣镄汀?。近年來Q型煙粉虱在各地?cái)U(kuò)散蔓延,危害 也越來越重,逐漸上升為主要的致害類型。"?!?,江蘇省煙粉 虱生物型的調(diào)查結(jié)果也印證了這一點(diǎn)。與B型相比,Q型煙 粉虱在一些植物寄主上生殖力更強(qiáng)、發(fā)育更快、危害更大,同 時(shí)對新煙堿類農(nóng)藥具有更高的抗藥性 。最近的研究結(jié) 果顯示Q型煙粉虱對啶蟲脒、吡蟲啉、噻蟲嗪等新型煙堿類 殺蟲劑的抗藥性是B型煙粉虱的20~170倍 ,這可能是 其迅速擴(kuò)散蔓延的一個(gè)原因。 近年來隨著各地貿(mào)易交流的頻繁,外來煙粉虱的入侵機(jī) 會也日趨增加,各地?zé)煼凼娜肭稚镄涂赡懿煌耆唷⊥?,因此針對?dāng)?shù)氐臒煼凼l(fā)生狀況,展開煙粉虱的生物 型調(diào)查有著重要的意義。一方面,調(diào)查有助于明確當(dāng)前煙粉 虱的優(yōu)勢生物型,為揭示新生物型的入侵機(jī)制奠定基礎(chǔ),同時(shí)?。玻保浮〗K農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)?。玻埃保材甑冢玻妇淼冢逼凇∫矠榻窈蟮木C合防控指明方向,美國很長一段時(shí)間在煙粉虱 防治上的失敗與其忽視煙粉虱的生物型有關(guān)??;另一方面,煙 粉虱作為番茄黃化曲葉病毒在內(nèi)的多種病毒的傳播媒介,對 其生物型展開研究也有助于揭示番茄黃化曲葉病毒的發(fā)生規(guī) 律及成災(zāi)機(jī)理,為番茄黃化曲葉病的防控提供技術(shù)支撐。 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